Estudo da interferência
do anticoagulante EDTA nos analitos do hemograma, relacionados ao tempo pós
coleta.
Heloisa Helena Arantes
Gallo da Rocha; médica hematologista; Fellow da International Society of
Hematology, Membro da American Society of Hematology, Membro do Colégio
Brasileiro de Hematologia; Membro da Sociedade Brasileira de Hematologia;
José Viegas; biólogo;
Supervisor da Unidade Botafogo de Emergência do Laboratório Diagnósticos da
América NTO/Rio Marca Lâmina.
Silvana Marcharett;
bióloga, funcionária da Unidade Botafogo de Emergência do Laboratório
Diagnósticos da América, Marca Lâmina NTO/Rio.
Rubem Menna Barreto;
estudante de biologia; estagiário do Setor de Hematologia do Laboratório
Diagnósticos da América/NTO Rio. Marca Lâmina.
Endereço para
Correspondência: Rua Francisco Otaviano 23; Bl. 1 /403- Rio de Janeiro; CEP
22080- 040.
Tel: 21- 22879604
FAX- 21- 22478273
Gallo da Rocha,HH;
Viegas,J, Marcharett, S, Mena Barreto R: Setor de Hematologia do Laboratório Diagnósticos
da América/ Marca Lâmina/NTO Rio de Janeiro; RJ.28/02/2001.
Resumo:
A partir da necessidade
cada vez maior que se impõe aos Laboratórios procederem coleta de sangue e
remeterem ao Laboratório de Hematologia em tempos que variam até de 12 horas
após a coleta e da realização da leitura das lâminas somente de hemogramas
anormais, resolvemos observar as alterações sofridas pelas células de acordo
com o tempo de exposição ao anticoagulante EDTA.
As análises foram feitas
logo após a chegada dos tubos de hemogramas normais ao Setor (cerca de 30 minutos após a coleta)-
que foi considerada hora zero e depois após 2,4,6,8,10,12 e 24 horas(dos mesmos pacientes da hora zero) .
O contador automatizado
de células do hemograma utilizado o
Sysmex NE 800 que faz um estudo completo
do hemograma, incluindo a contagem diferencial de leucócitos usando técnicas
ópticas e por impedância.
Foi feito um estudo
paralelo dos dados dos laudos das lâminas feitas pelos citologistas nos mesmos
horários do aparelho e comparamos os resultados obtidos.
Concluímos 1. hemogramas feitos em postos distantes podem
ser feitos com precisão pelo analisador automático (até 8 horas se for
hemograma normal e até 6 horas se não for hemograma normal ).
2. se houver alarmes de grumos
plaquetários com trombocitopenia devido
ao anticoagulante EDTA, o paciente deve
ter seu sangue coletado dentro do Setor de Hematologia, para que suas plaquetas
não tenham tempo de sofrer a ação do EDTA.
3. nos casos de solicitação de estudo
semiológico do sangue periférico é necessário que se faça a lâmina no ato da
coleta.
Summary
Automated blood cell
analyser have been evolving since the late 1960’s and the instruments are now
available of analysing blood samples with accuracy and precision.
In order to have our own
experience in spite of the instruction manual, and to become aware about the
modifications suffered by the different cells in contact with the anticoagulant
(EDTA) thinking about time exposition we decided to have fifteen to have fifteen normal blood samples to be
processed at different time intervals:
Zero, 2, 6, 8, 10, 12 and
24 hours for all parameters of blood counting. At the same time we studied the
slides obtained at those intervals, to establish the cellular modifications
observed by us.
We conclude that normal
blood samples can be processed until 24 hours after the venipuncture.
On the contrary, the
anormal samples (generally the urgent ones) must be processed in 8 to 12 hours.
If it is important to
have the cytological platelets analyses the slides must be done at the time of
the venipuncure.
Introdução:
Os analisadores
automatizados tem uma performance muito precisa com relação aos diferentes
analitos do hemograma.
Foi feito um estudo no
qual comparamos as leituras de hemogramas normais lançados por um analisador
(Sysmex) com as leituras feitas pelos citologistas do Setor de Hematologia e o
resultado não apresentou diferenças estatisticamente significativas
(observações não publicadas).
O objetivo desse estudo
foi de verificar as diferentes variações dos analitos do hemograma em função do
tempo de exposição ao anticoagulante EDTA. As leituras de lâmina foram feitas
pelo aparelho e pelos citologistas afim de comparação dos laudos obtidos dos
dois grupos
Materiais
e Métodos:
As amostras foram obtidas
de duas fontes: Setor de Hematologia
e Unidade Botafogo de Emergência do
Laboratório Diagnósticos da América , Marca Lâmina/ NTO Rio.
15 amostras de pacientes
foram estudadas no mês de janeiro de 2001. Os analitos estudados foram os
seguintes:
1- Contagem de leucócitos
(WBC)
2- Percentagem de
neutrófilos (NEUT)
3- Percentagem de monócitos
(MONO)
4- Percentagem de
eosinófilos (EOS)
5- Percentagem de basófilos
(BASO)
6- Contagem de hemácias
(RBC)
7- Dosagem de hemoglobina
(HGB)
8- Valor do hematócrito
(HCT)
9- Volume globular médio
(VCM)
10- Hemoglobina globular
média (HCM)
11- Concentração de
hemoglobina globular média (CHCM)
12- RDW- índice de
anisocitose
13- Contagem de plaquetas
(PLT)
O analisador foi o
Sysmex, NE 800(TOA Medical Eletronics, Kobe, Japão). Os citologistas foram os
autores desse trabalho.
Todas as amostras
coletadas vieram do Setor de Coleta do Laboratório Diagnósticos da América,
Marca Lâmina /NTO Rio, em frascos a vácuo com EDTA,
As análises foram feitas
logo após a chegada no Setor (cerca de 30 minutos após a coleta)- que foi
considerada hora zero e depois após 2,4,6,8,10,12 e 24 horas .
O Sysmex faz um estudo
completo incluindo a contagem diferencial de leucócitos usando técnicas ópticas
e por impedância.
Os estudos de
reprodutibilidade, linearidade, estabilidade de calibração são feitos
diariamente antes de se começar a rotina.
Estatística
utilizada:
1. Análise de regressão:
Determina a relação entre duas variáveis.
2. ANOVA (Análise da
Variância) com o valor F. O nível de
significância quando for igual ou menor que 0,05 (p-value), indica correlação entre as duas variáveis.
3. Foi feito o Teste t para
comparação entre dois grupos de resultados, que dá a diferença de média entre
duas amostras e considera-se significativo quando o p value é igual ou menor
que 0,05. Se isso não ocorre é porque existe uma real diferença entre as médias
ou então erro amostral (amostra pequena).
Como exemplo, abaixo
colocamos como foram analisados os dados fornecidos pelo hemograma (planilha
Excell) :
SAM201 – tempo em horas. |
0 |
2 |
4 |
6 |
8 |
10 |
12 |
WBC |
5,71 |
5,72 |
5,42 |
5,48 |
5,54 |
5,68 |
5,5 |
NEUT |
60,1 |
57,3 |
58,5 |
57,2 |
57,3 |
56,1 |
56,8 |
LINF |
25,2 |
26,2 |
25,6 |
25,2 |
23,6 |
24,5 |
24,9 |
MONO |
11,2 |
12,2 |
12,4 |
13 |
14,8 |
14,8 |
14,2 |
EOS |
3 |
3,8 |
3,1 |
3,5 |
3,4 |
3,7 |
3,6 |
BASO |
0,5 |
0,5 |
0,4 |
1,1 |
0,9 |
0,9 |
0,5 |
RBC |
3,51 |
3,48 |
3,51 |
3,53 |
3,54 |
3,49 |
3,49 |
HGB |
11,9 |
11,9 |
11,9 |
11,9 |
11,9 |
11,9 |
12 |
HCT |
35,8 |
36 |
36,2 |
36,3 |
36,5 |
36 |
36,1 |
VCM |
102 |
103,4 |
103,1 |
102,8 |
103,1 |
103,2 |
103,4 |
HCM |
33,9 |
34,2 |
33,9 |
33,7 |
33,6 |
34,1 |
34,4 |
CHCM |
33,2 |
33,1 |
32,9 |
32,8 |
32,6 |
33,1 |
33,2 |
RDW |
14,6 |
14,5 |
14,8 |
14,9 |
14,7 |
14,8 |
15,2 |
PLT |
150 |
150 |
150 |
150 |
150 |
150 |
150 |
VPM |
10,2 |
9,8 |
10,3 |
10,4 |
10,4 |
10,5 |
10,4 |
|
|
|
|
|
|
|
|
Resultados:
A Análise de Regressão feita em todos os analitos mostrou-se
significativa com o valor de p < 0,05.
Dessa forma aceita-se a
hipótese da influência do tempo de exposição afetando o hemograma como um todo.
O
teste t de Duas Amostras Em Par Para Média mostrou:
Entre 0 e 2 hs: p=0.7
Entre 0 e 4 hs: p=0.63
Entre 0 e 6 hs: p=0.79
Entre 0 e 8 hs: p=0.84
Entre 0 e 10 hs: p=0.7
Entre 0 e 12 hs: p=0.53
Entre 0 e 24 hs: p=0.62
Quando se compara a
partir das 4 horas de exposição ao EDTA:
Entre 4 e 6 hs: p=0.45
Entre 4 e 10 hs: p=0.84
Entre 4 e 12 hs: p=0.56
Entre 4 e 24 hs: p=0.62
Com este estudo podemos
concluir que as diferenças entre os diversos tempos não foram significativas.
E assim sucessivamente os
15 hemogramas foram plotados e os analitos estudados e comparados
estatisticamente um a um.
Com este estudo podemos
concluir que as diferenças entre os diversos tempos não foram significativas.
Observações feitas pela
análise das lâminas de hemogramas nos diferentes períodos de tempo de exposição
ao EDTA:
Quanta à analise da lâmina nos diferentes tempos de exposição ao EDTA verificou-se que em cerca de 10% dos casos, a contagem de bastões teve um aumento de 5 a 19%, a partir de 6 horas da coleta, com uma média de 8%.Em 20% dos casos houve alarme de blastos e/ ou linfócitos atípicos após 8 a 24 horas da coleta.
Em 80% dos casos não
houve alarme de atipias de linfócitos independente do tempo de coleta porém
após da Sexta hora quase todas as lâminas mostraram atipias linfocitárias com
citoplasmas ameboides à semelhança de células de Downey. Frisamos que o
contador não emitiu alarme de atipias
linfocitárias nessa mesma hora e que na lâmina inicial, feita na hora zero não
havia presença de atipias linfocitárias.
Em cerca de 20% das
lâminas observou-se granulações tóxicas nos neutrófilos a partir de 12 horas de
exposição dos neutrófilos ao EDTA.
Em alguns casos
observamos células em apoptose somente após 12 horas da exposição.
Em semiologia de lâminas
de pacientes com mononucleose, mielodisplasia,
em tratamentos quimioterápicos ou pós transplante de medula óssea ,
podemos observar com maior freqüência células em apoptose, no primeiro caso
mononucleose, de células apoptóicas linfóides e nos outros casos, células
mielóides em apoptose. Até doze horas de exposição ao EDTA não ocorre apoptose de células
linfoides ou mielóides normais, somente após 12 horas após a exposição.
Discussão:
Esse estudo demonstrou
que os resultados dos diversos parâmetros do hemograma se feitos as 2, 4, 6, 8,
10, 12 ou 24 horas após a coleta, deixando o sangue total em contato com o anticoagulante
EDTA durante todos esses tempos não afeta de maneira clinicamente importante o
resultado emitido pelo Analisador Automático.
É interessante ressaltar
que quanto à análise semiótica das células feita pelo
hematologista/citologista, muito se perde com as lâminas coradas a partir de um
tubo de sangue com EDTA(2). Os fatores mais importantes que foram notados nesse
estudo em comparação com os dados obtidos pelo Analisador automático é que o
mesmo consegue determinar mais acuradamente os diferentes tipos de células,
mesmo edemaciadas ou alteradas pelo EDTA, coisa que fica difícil para o olho
humano avaliar, por exemplo, uma lâmina retirada de um tubo de EDTA de 24
horas- notamos alterações nos linfócitos, que ficam com atipias, as plaquetas
maiores e soltas e com comportamento anormal, e as granulações tóxicas nos
neutrófilos ficam bem mais evidentes.
Sabe-se também que as
alterações nas plaquetas começam após 15 minutos de exposição com EDTA e depois
se mantém de uma maneira praticamente constante( 1).
O estudo feito com a
Análise de Regressão mostrou que havia correlação entre o tempo de exposição do
sangue e os resultados de todos os analitos estudados.
O estudo comparativo não
foi consistente com o estudo da Análise de Regressão desses mesmos itens já que
o Teste t (p value) foi maior que o
nível de significância, levando a aceitar a hipótese nula, ou seja o fator
tempo de exposição ao EDTA não influenciou nos resultados dos analitos emitidos
pelo aparelho; os laudos emitidos pelos citologistas não devem ser procedentes
de lâminas distendidas em um tempo maior
que 6 horas após a coleta.
Conclusão:
·
O
estudo da Análise da Regressão mostrou-se incompatível com os dados obtidos
pelo Teste t devido a um erro amostral (amostra pequena).
·
Os
hemogramas feitos em postos distantes poderão ser feitos com precisão pelo
Analisador automático (até 24 horas se for hemograma normal, até 6 horas
se for hemograma anormal, pois nesses
casos os laudos são dados pelos citologistas ). Em virtude do flebotomista não
saber se o sangue que está coletando dará resultado normal ou anormal, é
importante que o sangue chegue ao Setor de Hematologiaantes de pelo menos 6
horas após a coleta
·
Se
o paciente apresentar grumos plaquetários com trombocitopenia devido ao anticoagulante EDTA e o aparelho
lançar um aviso (clumps) o paciente deve ter seu sangue coletado dentro do
Setor de Hematologia, para que suas plaquetas não tenham tempo de sofrer a ação
do EDTA.
·
Nos
casos de solicitação de estudo semiológico do sangue periférico é necessário
que se faça a lâmina no ato da coleta.
Referências
Bibliográficas:
1. Brummitt, DR Barker, HF:
The determination of a reference range for new platelets parameters produced by
the Bayer ADVIA 120 full blood count analyser;Blackwell Science Ltda.
Clin.Lab.Haem: 22, 103- 107;2000.
2. PattersonK. Platelets
parameters generated by automated blood counters. CME Bulletin Haematology, 1:
13- 16;1997.